深圳子科生物自主研发酶联免疫分析检测试剂盒，品牌为ZIKER,可以检测 Human，Rat、Mouse、Porcine、Sheep、Monkey、Goat、Bovine、Canine、Rabbit、Chicken、Duck、Fish、Plant 等各种样本，品种齐全，质量保证，免费代测、技术全程支持服务，我公司长期跟各大高校科研实验室保持课题合作，经验丰富，质量稳定！我们所有的产品都是我司直接供货，无中间差价，直接供货，让您以*惠的实验预算完成您的实验！

鱼磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶ELISA试剂盒参数介绍

ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：

1、已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；

2、酶标记的抗原或抗体（结合物）；

3、酶的底物；

4、阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；

5、结合物及标本的稀释液；

6、洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；

酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

实验测定具体步骤：

1．确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目，并增加 1 孔作为 TMB 空白显色孔。 总数=样品数+9；做双份检测时×2。其余重包装好放如冰箱中。 

2．将标准品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中，1 孔只加样品稀释液的作为零孔。对于血清、体液、 组织匀浆或细胞培养上清，直接加已用样品稀释液稀释的样品 100μ ι 。 

3．酶标板加上盖，37℃反应 90 分钟。 

4．反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。 不洗。 

5．将准备好的生物素抗体工作液按每孔 0.1ml 依次加入。（TMB 空白显色孔除 外）。37℃反应 60 分钟。 

6． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗涤 3 次，每次浸泡 1 分钟左右。 

7．将准备好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入（TMB 空白显色孔除外）。37℃反应 30 分钟。 

8． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗涤 5 次，每次浸泡 1-2 分钟左右。 

9．按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分钟的 TMB 显色液，37℃避光反应 20-25 分钟 （注意：显色时间供参考，因用户实验室条件差异，显色时间会有所不同。此时肉眼可 见标准品的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色，后 3-4 孔差别不明显）。 

10．按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 终止液，此时蓝色立转黄色。 

11．用酶标仪在 450nm 测定 O.D.值。

鱼磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶ELISA试剂盒参数介绍有两种设定空白对照的方案： 

（1）将 TMB 空白显色孔设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去 TMB 空白显色孔的 吸 光 值 后 ， 在 坐 标 纸 上 画 出 曲 线 ， 以 吸 光 值 作 为 纵 坐 标 ， 以 浓 度 作 为 横 坐 标 。 

（2）将零孔设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去零孔的吸光值后，得到的数据可以 直接在坐标纸上画出曲线。 

鱼磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶ELISA试剂盒参数介绍

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