产品名称：人肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA检测试剂盒

英文名称：Human Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA KIT 

产品规格：96T（人份）/48T（人份）（单孔检测分别可以检测90份样本，42分样本，一般都需要留6个孔做标准曲线）。

检测方法：酶联免疫分析ELISA方法

有效期： 4 个月(4℃)；8 个月（-20℃）。

保存方法： 2-8℃（频繁使用时）; -20℃（长时间不用时）。

品牌：子科生物ZIKER

质量保证：我告诉所有产品均需要经过质检通过后，才允许出库！

适用范围：实验结果仅供科研参考，不推荐用于临床诊断结果。

ELISA常用的方法：双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA等，子科生物ELISA产品主要用双抗体夹心法。

标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

产品性能：灵敏度高，特异性强，重复性。

产品包装：盒（KIT）（含试剂+酶联板+覆膜等）

检测范围：详细请咨询在线客服或拨打销售苏经理。

人肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA检测试剂盒

试剂盒组成及试剂配制

1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。

2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

实验原理：

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

标本的采集及保存

1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过了夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响*检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本的稀释原则：

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。*计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。

如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

人肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA检测试剂盒操作步骤

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。

3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。

5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

结果判定：

子科生物所供ELISA试剂盒结果判定一般分定性测定和定量测定两种：

1、定性测定

　　定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的*稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。

2、定量测定

　 ELSIA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线*点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数纸，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。

　　测定小分子量物质常用竞争其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。ELISA测定的标准曲线示例见图注意图中横坐标为对数关系，这更有利于测定系统的表达。

人肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA检测试剂盒

ZK-H574人苯丙氨酸羟化酶(PAH)ELISA检测试剂盒human Phenylalanine Hydroxylase (PAH) ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H575人异亮氨酰tRNA合成酶(IARS)ELISA检测试剂盒human Isoleucyl tRNA Synthetase (IARS) ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H576人S-期激酶关联蛋白1(SKP1)ELISA检测试剂盒human S-Phase Kinase Associated Protein 1 (SKP1) ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H577人细胞间粘附分子1（ICAM-1/CD54）ELISA检测试剂盒Human intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1 ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H578人脂联素（ADP）ELISA检测试剂盒Human adiponectin,ADP ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H579人脂氧素A4（LXA4）ELISA检测试剂盒Human Lipoxin A4,LXA4 ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H580人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因A（MICA）ELISA检测试剂盒Human MICA  ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H581人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B（MICB）ELISA检测试剂盒Human MICB  ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H582人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因D（MICD）ELISA检测试剂盒Human MICD  ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H583人脂多糖（LPS）ELISA检测试剂盒Human Lipopolysaccharides,LPS ELISA kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H584人糖连抗原199（CA199）ELISA检测试剂盒Human CA199   ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H585人糖连抗原153（CA153）ELISA检测试剂盒Human CA153   ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H586人组织因子途径抑制物（TFPI）ELISA检测试剂盒Human Tissue factor pathway inhibitor,TFPI ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H587人组织多肽抗原（TPA）ELISA检测试剂盒Human Tissue Polypeptide Antigen,TPA ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H588人组织因子（TF）ELISA检测试剂盒Human Tissue factor,IF ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H589人组织相容性2-K1-K区（H2-K1）ELISA检测试剂盒human Histocompatibility 2-K1-K region,H2-K1 ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H590人类似cDNA顺序BC027382ELISA检测试剂盒human similar to cDNA sequence BC027382 ELISA Kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物

ZK-H591人类似RIKENcDNA4931408D14基因ELISA检测试剂盒human similar to RIKEN cDNA 4931408D14 gene ELISA kit酶联免疫ELISA. 96T/48TZIKER子科生物