Mol Ther：吴森/杜旭光/王建勋联合诺奖团队开发一步式、高效率大片段定点整合CAR-T细胞制备平台

嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法已在血液肿瘤治疗中取得革命性成功。然而，目前主流的CAR-T产品依赖慢病毒或逆转录病毒将CAR基因随机插入基因组，存在插入突变、基因沉默和产品异质性高等风险。虽然CRISPR技术为定点整合CAR提供了可能，但在原代T细胞中实现大片段（如3 kb以上的CAR）仍面临效率低、细胞毒性大、工艺复杂等瓶颈，严重制约其临床应用。

2026年1月2日，由中国农业大学吴森教授、杜旭光教授，北京中医药大学王建勋教授联合美国犹他大学Mario R. Capecchi教授团队在Molecular Therapy（IF=12）在线发表题为：BASIC Enables Selection-Free Efficient Knock-In of Large DNA in Primary Human T Cells的研究论文。

该研究提出并验证了一种全新的免疫细胞基因工程体系——BASIC（BaEVshort–AAV6 Site-specific Integration for CAR-T），在无任何筛选条件下可快速高效获得定点整合型CAR-T细胞，具备更高安全性和更强的杀伤功能，为免疫细胞治疗提供了一条全新的技术路径。



类病毒颗粒（VLP）是一种具有病毒外部结构但缺乏病毒遗传物质的病毒组装体，利用基因工程手段可以将其改造成基因编辑核酸酶的递送工具。研究团队为VLP改造了更适配的包膜蛋白BaEVshort，该包膜蛋白来源于BaEV的截短体形式。与传统的vsvg包膜VLP相比，能够大幅提高VLP的包装滴度，显著提升了对T细胞和NK细胞的递送效率。

为了解决传统CAR-T细胞利用逆转录病毒或慢病毒随机整合CAR带来的致瘤性问题，以及电转带来的细胞毒性问题。研究团队以AAV作为CAR的供体模板，配合VLP可一步转导法获得位点特异性整合的CAR-T细胞，并将该技术平台命名为BASIC：BaEVshort–AAV6 Site-specific Integration for CAR-T。

BASIC仅通过一步病毒转导，即可同时实现TCR高效敲除（>95%）与CAR基因在TRAC位点的精准敲入（>85%），全程无需电穿孔、无需药物筛选，并保持高水平细胞活性和增殖能力。BASIC平台制备的CAR-T细胞在体内和体外均展现出卓越的抗肿瘤能力。

在体外水平上，对CD19+肿瘤细胞杀伤力更强，细胞因子分泌水平更高，且在多次肿瘤刺激后仍保持杀伤功能，不易耗竭。表型检测显示，CAR表达高度均一， 耗竭标志物（如PD-1、TIM-3）表达显著降低，显示具有更优的持久性与安全性。在体内水平上，小鼠模型中实现100%肿瘤清除与长期存活，显著优于传统慢病毒方法（存活率仅37.5–62.5%）。

除了T细胞外，该研究筛选得到的BaEVshort包膜蛋白也更适配于VLP对NK细胞的转导。在T细胞和NK细胞中可实现多基因高效编辑（效率达60–80%），为开发 “现货型” 通用CAR-T/NK产品奠定基础，可灵活靶向多个基因位点整合CAR，满足不同治疗需求。

BASIC平台采用瞬时递送策略，极大提升安全性。其单步病毒转导流程大幅简化生产工艺，降低对起始细胞数量的需求，并兼容现有GMP生产体系，具备强大的临床可扩展性与产业化前景。



BASIC平台模式图（图源Molecular Therapy ）

中国农业大学生物学院吴森教授、杜旭光教授，北京中医药大学王建勋教授，以及诺贝尔奖得主Mario R. Capecchi教授为本文章的通讯作者。中国农业大学博士生王可心、博士后李晓瑞、已毕业博士李瑾为论文的共同第一作者。本研究得到国家重点研发计划、畜禽生物育种全国重点实验室创新项目和中国农业大学“2115人才发展计划”的资助。